一、非洲豬瘟變異株的定義

非洲豬瘟變異株包括基因缺失株、自然變異株、自然弱毒株等，與2018年傳入的非洲豬瘟毒株相比，該類(lèi)毒株的基因組序列、致病力等發(fā)生明顯變化。生豬感染該類(lèi)毒株后，潛伏期延長(zhǎng)，臨床表現(xiàn)輕微，后期可出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹、皮膚出血型壞死灶，感染母豬產(chǎn)仔性能下降、死淘率增高，出現(xiàn)流產(chǎn)死胎/木乃伊胎等。與傳統(tǒng)的流行毒株相比，生豬感染該類(lèi)毒株后排毒滴度低、間隙性排毒，難以早期發(fā)現(xiàn)。

二、監(jiān)測(cè)方法

（一）加強(qiáng)臨床巡視

時(shí)刻關(guān)注豬場(chǎng)各個(gè)環(huán)節(jié)豬只異常情況，想方設(shè)法提升飼養(yǎng)人員責(zé)任心，一旦發(fā)現(xiàn)豬只出現(xiàn)嗜睡、輕觸不起、采食量減少，發(fā)熱、皮膚發(fā)紅、關(guān)節(jié)腫脹/壞死、咳喘、腹式呼吸，育肥豬死淘率增高，母豬流產(chǎn)或出現(xiàn)死胎/木乃伊胎等可疑臨床表現(xiàn)時(shí)，應(yīng)第一時(shí)間采樣檢測(cè)。

（二）改進(jìn)主動(dòng)監(jiān)測(cè)

每周對(duì)豬群進(jìn)行病原和抗體檢測(cè)。在豬群進(jìn)行疫苗接種、轉(zhuǎn)群、去勢(shì)，或母豬分娩后，應(yīng)進(jìn)行采樣檢測(cè)。豬場(chǎng)出現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)暴露或周邊豬場(chǎng)出現(xiàn)感染時(shí)，按需進(jìn)行采樣檢測(cè)。

（三）抽樣策略

對(duì)可疑豬的同舍和關(guān)聯(lián)舍豬群，采集深部咽拭子和抗凝血，進(jìn)行病原檢測(cè)，必要時(shí)采集血清進(jìn)行抗體檢測(cè)。對(duì)可疑豬及臨近豬接觸的地面、欄桿，以及舍內(nèi)人員接觸的物品等，采集環(huán)境樣品進(jìn)行病原檢測(cè)。病原檢測(cè)如果混檢，建議混樣數(shù)量不超過(guò)5個(gè)；抗體檢測(cè)不得混樣。

（四）樣品選擇

1. 對(duì)可疑豬，按檢出概率高低排序，依次采集深部咽拭子、前腔靜脈抗凝血（EDTA）或尾根血、口鼻拭子。

2. 對(duì)分娩母豬，應(yīng)采集臍帶血、胎衣；對(duì)死胎和流產(chǎn)胎兒，應(yīng)采集淋巴結(jié)、脾臟等組織樣品。

3. 對(duì)病死豬，優(yōu)選采集部位為淋巴結(jié)、脾臟、骨髓和肺臟。

4. 血清樣本，按常規(guī)方法制備。

三、檢測(cè)方法及配套

（一）采樣

豬場(chǎng)用戶(hù)在進(jìn)行環(huán)境樣監(jiān)測(cè)或者群體普查時(shí)，可在采樣時(shí)使用快靈的軟拭子和多腔體病毒采樣管進(jìn)行高效采樣及混樣。

軟拭子頭部具有彈性，彈性絨毛拭子頭較容易彎曲來(lái)適應(yīng)豬場(chǎng)不同的異性部位，增大采樣接觸面積，其面積比普通紡錘形拭子多2-3倍，能更多采集目標(biāo)樣品。

多腔體采樣管不同于市面上傳統(tǒng)的采樣管，其內(nèi)部結(jié)構(gòu)分別為洗滌腔及擠存腔，洗滌腔體內(nèi)設(shè)有多個(gè)豎向刮擦片，對(duì)進(jìn)入腔體中旋轉(zhuǎn)的拭子進(jìn)行接觸刮擦，幫助絨毛表面的樣品洗脫釋放。多個(gè)擠存錢(qián)腔可以最多十根軟拭子，釋放了樣本后將拭子插入洗滌腔上部的擠壓腔，可將彈性植絨拭子吸附的洗脫液擠壓出來(lái)并從縫隙部位回流到洗滌腔。相比傳統(tǒng)采樣管，僅用少于1/5容積的液體就能充分對(duì)拭子樣品進(jìn)行洗滌，能直接提高采樣溶液病原濃度達(dá)5-6倍。

（二）病原檢測(cè)方法

原則上參照“農(nóng)辦牧〔2020〕39號(hào)”附件《非洲豬瘟病毒流行株與基因缺失株鑒別檢測(cè)規(guī)范》。

對(duì)采集的樣本進(jìn)行核酸提取，可選用快靈的手動(dòng)柱法提取試劑盒，樣本量太大可使用快靈磁珠提取試劑盒。

擴(kuò)增時(shí)建議選用快靈ASFV流行株/基因缺失變異株鑒別試劑盒，即P72/MGF/CD2V鑒別試劑盒（下稱(chēng)鑒別試劑盒），為了適配不同客戶(hù)的不同儀器，快靈鑒別試劑盒在標(biāo)準(zhǔn)試劑盒的基礎(chǔ)上進(jìn)行部分優(yōu)化，僅涉及檢測(cè)項(xiàng)目，試劑盒靈敏度、特異性等基本功能保持一致，方便客戶(hù)根據(jù)不同的需求進(jìn)行選擇。不同試劑盒性能見(jiàn)表1：

表1：不同鑒別試劑盒性能說(shuō)明

（三）抗體檢測(cè)方法  采用間接ELISA、阻斷ELISA等方法檢測(cè)抗體水平，詳見(jiàn)《非洲豬瘟診斷技術(shù)》（GB/T 18648）

抗體檢測(cè)的意義對(duì)于急性疾病的爆發(fā)，病毒檢測(cè)（PCR）最有用，血清學(xué)診斷價(jià)值較低，因?yàn)楦腥镜呢i大多數(shù)在抗體產(chǎn)生之前死亡；非洲豬瘟變異株（包括基因缺失株、自然變異株、自然弱毒株等）的出現(xiàn)，生豬感染該類(lèi)毒株后，潛伏期延長(zhǎng)，臨床表現(xiàn)輕微，感染該類(lèi)毒株后排毒滴度低、間隙性排毒，難以早期發(fā)現(xiàn)，因此抗體檢測(cè)的作用凸顯。如果沒(méi)有接種過(guò)疫苗，抗體的存在表明感染過(guò)非洲豬瘟病毒。上?？祆`非洲豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（間接法）系用大腸桿菌表達(dá)的非洲豬瘟病毒P30蛋白包被酶標(biāo)板，P30蛋白是病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，在感染的早期表達(dá)和分泌，可用于感染后免疫反應(yīng)的的早期檢測(cè)。

ELISA抗體檢測(cè)原理 ELISA試劑盒是根據(jù)固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)設(shè)計(jì)而成的。在本檢測(cè)過(guò)程中，樣本暴露于包被在微量板孔內(nèi)的非感染性非洲豬瘟抗原。非洲豬瘟抗體（如果檢測(cè)樣本中存在）則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有非洲豬瘟抗體。

上?？祆`非洲豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（間接法）使用便捷、快速、敏感性高、特異性強(qiáng)，是理想的非洲豬瘟病毒抗體測(cè)工具。